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Feb 28, 2024

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Nature Communications volume 13, número do artigo: 4469 (2022) Citar este artigo 5548 Acessos 5 citações 58 Detalhes das métricas altmétricas Endoscópios de fibra ultrafina sem lentes oferecem minimamente invasivos

Nature Communications volume 13, número do artigo: 4469 (2022) Citar este artigo

5548 acessos

5 citações

58 Altmétrico

Detalhes das métricas

Os endoscópios de fibra ultrafina sem lente oferecem investigação minimamente invasiva, mas operam principalmente como um tipo rígido devido à necessidade de calibração prévia de uma sonda de fibra. Além disso, a maioria das implementações funciona no modo de fluorescência, em vez do modo de imagem sem rótulo, tornando-as inadequadas para diagnóstico médico geral. Aqui, relatamos um endoscópio de fibra ultrafina totalmente flexível, obtendo imagens holográficas 3D de tecidos não corados com resolução espacial de 0,85 μm. Usando um feixe de fibras nuas tão fino quanto 200 μm de diâmetro, projetamos uma configuração de imagem holográfica de Fourier sem lente para detectar seletivamente reflexos fracos de tecidos biológicos, uma etapa crítica para imagens de refletância endoscópica sem rótulos. Um algoritmo exclusivo foi desenvolvido para reconstrução de imagem holográfica sem calibração, permitindo-nos obter imagens através de uma passagem estreita e curva, independentemente da curvatura da fibra. Demonstramos imagens de refletância endoscópica de tecidos intestinais de ratos não corados que são completamente invisíveis aos endoscópios convencionais. O endoscópio proposto irá agilizar um diagnóstico mais preciso e precoce do que antes, com complicações mínimas.

A microscopia óptica é uma ferramenta essencial para a compreensão da fisiologia dos tecidos vivos devido à sua alta resolução espacial, especificidade molecular e mínima invasividade1. No entanto, esses benefícios estão fora de alcance quando os objetos alvo estão localizados dentro de passagens curvas ou sob tecidos que dispersam a luz. Ao visualizar essas áreas de difícil acesso, os endoscópios revolucionaram a prática médica para o diagnóstico precoce de doenças. Na última década, endoscópios com resolução microscópica foram desenvolvidos para diagnósticos mais precisos e precoces2,3. Além disso, a demanda por endoscópios ultrafinos (com diâmetro de sonda bem abaixo de 1 mm) tem crescido continuamente para minimizar o desconforto e as complicações acompanhadas pela inserção da sonda endoscópica3,4,5,6,7.

A microscopia endoscópica normalmente emprega várias fibras ópticas como canais condutores de luz finos e flexíveis. Por exemplo, uma única fibra óptica tem sido usada anexando vários tipos de dispositivos de varredura e elementos ópticos ao lado distal da fibra voltado para a amostra 4,8,9,10. Imagens multifotônicas4,9,11,12,13 e tomografia coerente óptica (OCT)14,15,16 foram implementadas nesta configuração. No entanto, o scanner conectado à fibra costuma ser muito volumoso para ser ultrafino, mesmo que o diâmetro da fibra em si seja pequeno. Meios de orientação de imagem, como feixes de fibras coerentes, são usados ​​para eliminar a necessidade de scanners distais, tornando assim a sonda do endoscópio mais fina e robusta. Núcleos de fibra individuais no feixe são usados ​​como pixels de imagem, anexando óptica de imagem à ponta do feixe de fibras ou fazendo contato direto da ponta da fibra com a superfície da amostra . Nessa configuração, a modalidade de imagem por fluorescência de campo amplo foi implementada para diagnóstico médico rápido19,20. E a imagem de fluorescência confocal foi realizada pela varredura em alta velocidade do foco no lado proximal da fibra fora do sujeito, com17,21 ou sem22 lente distal. Uma desvantagem crítica desta configuração é a sua incapacidade de adquirir imagens de refletância de tecidos biológicos sem rótulos. A forte reflexão traseira da iluminação que ocorre nos núcleos das fibras coincide exatamente com sinais de reflexão muito mais fracos dos tecidos biológicos. Esta é uma das principais razões pelas quais o modo de imagem de fluorescência é amplamente utilizado, no qual a emissão de fluorescência pode ser separada do ruído de retro-reflexão usando filtros coloridos. Como a maioria das imagens de fluorescência requer coloração, seu uso para diagnóstico clínico geral é limitado. Uma solução simples para imagens de refletância intrínseca é introduzir uma fibra separada para a iluminação. No entanto, isto só foi aplicável para imagens macroscópicas devido ao diâmetro aumentado da sonda e ao baixo poder de resolução espacial limitado pela distância da amostra de fibra necessária para a iluminação separada.

1 cm), reflection from the glass surface was negligible. Therefore, the reflection signal captured by the fibre bundle was mainly from the surface of intestine tissues as well as the distal side of fibre itself. In this geometry, the conventional contact-mode endoscope couldn’t visualize anything, nor the clue of the existence of the villi (Fig. 5c). This is because the reflection signal from the surface of the villi was completely obscured by that from the fibre surface due to the small index difference between the tissue and water/agarose gel. This shows the difficulty in realizing the reflectance-mode endoscope imaging for biological tissues. On the contrary, our Fourier holographic endoscope could clearly visualize the external boundaries and morphology of the villi with high contrast (Fig. 5d). To cover the wide FOV, we moved the distal tip of the fibre bundle and consecutively imaged multiple sites of the villi. The recorded images were stitched to produce the extended image. From the sharpness of the boundaries of the villus, spatial resolution was estimated to be 2 μm. As ground truth, a confocal reflectance image was taken by a conventional microscope using an air-type 0.4 NA objective lens at a wavelength of 516 nm (Fig. 5b). The overall morphology of the villus and its boundaries were almost identical to those resolved by our endoscope image, validating the capability of our endoscope for imaging unstained tissues. It should be noted that the contrast of our endoscope image is slightly better than the conventional confocal reflectance image due to the addition of coherence gating explained below./p> 1 cm) on a slide glass. The distal tip of the fibre bundle was approximately 600 μm above the tissue surface with their gap filled with water. b Conventional reflectance image recorded by a confocal microscope using 0.4 NA objective lens at the wavelength of 516 nm. c Contact-mode reflectance endoscope image. d Fourier holographic endoscope image. Scale bars: 100 μm./p>